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氯霉素检测应如何正确操作?
发布时间:2019-07-17 点击量:41
? ? ?一、氯霉素检测具体实行步骤:
  样品制备
  a)将3克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。
  b)用离心机离心1700×g10分钟,取2mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。
  c)在此玻璃管中加入正己烷1mL,先将残余物完全溶解后,再加入1mL样品稀释液,震荡30秒钟。
  d)用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。
  稀释倍数:1
  若待测物为白虾可按以下流程将样品做8倍浓缩以增加检品敏感度
  a)将6克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。
  b)用离心机离心1700×g 10分钟,取4mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。
  c)在此玻璃管中加入正己烷2mL,先将残余物完全溶解后,再加入0.5mL样品稀释液,震荡30秒钟。
  d)用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。
  稀释倍数:0.125
  二、氯霉素检测的操作步骤:
  1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
  2、在另外的微孔中加入100mL已完成前处理的样品溶液。
  3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
  4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
  5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。
  6、较后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。
  7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。
  8、于室温下避光静置温育20分钟。
  9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
  10、用酶标仪于波长450nm下判读。
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